自誘導(dǎo)培養(yǎng)基背景原理

自誘導(dǎo)培養(yǎng)基Auto lnducion Medium (AIM)，包含LB Broth (AIM)，2x YT Broth (AlM), Terifc Broth (AIM)， Super Broth (AIM)。通常，外源蛋白在細(xì)營中表達(dá)時(shí)常便用IPTG誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，女Lac啟動(dòng)子。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到理想值時(shí)，通過向培養(yǎng)基中加入!PTG的方法誘導(dǎo)蛋白表達(dá)。使用這個(gè)自動(dòng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基，不再需要監(jiān)測細(xì)胞密度和添加PTG。葡萄糖作為半乳糖提縱子的陽過因子陽止細(xì)瑩利用α-乳糖，而被優(yōu)先代謝，促進(jìn)高密度生長。一旦培養(yǎng)基中的葡萄糖被耗盡(通第發(fā)生在對(duì)數(shù)期的后期)，乳糖被B-半乳糖苷酶轉(zhuǎn)換成異乳糖(葡萄糖-1,6-半乳糖)，而后者作為IPTG誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的誘導(dǎo)劑，引起乳糖阻過子從與DNA結(jié)合的位點(diǎn)上釋放，啟動(dòng)重組蛋白的表達(dá)。對(duì)于DE3基因型的E.col中，異乳糖使T7ac啟動(dòng)子去阻遏，并誘導(dǎo)lacUV5啟動(dòng)子表達(dá)T7 RNA聚合酶。通過這種方式，在細(xì)菌培養(yǎng)物生長到某一特定點(diǎn)時(shí)蛋白表達(dá)自發(fā)開始，省掉了監(jiān)測細(xì)胞密度(OD600)和添加IPTG這兩個(gè)步騾，與傳統(tǒng)IPTG誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)過程相比，使用自動(dòng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基極大地方便和簡化了試驗(yàn)流程。

自誘導(dǎo)培養(yǎng)基(lac啟動(dòng)子)(Auto-induction Medium)產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是在pET專用生長培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上開發(fā)而成的,它利用E.coi自身對(duì)培養(yǎng) 基中碳源和能源的調(diào)控利用機(jī)制,實(shí)現(xiàn)外源蛋白在細(xì)菌達(dá)到飽和期后的自動(dòng)誘發(fā)。

具有下列特點(diǎn):

1.不需添加任何IPTG或相關(guān)誘導(dǎo)物,節(jié)約成本。

2.免去密切監(jiān)控菌液密度的過程,尤其適合大規(guī)模篩選

3.細(xì)菌生長密度遠(yuǎn)高于IPTG誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)。

4.外源蛋白表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于IPTG誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)

5.本產(chǎn)品即開即用,操作簡單

6.與各種細(xì)胞培養(yǎng)容器兼容(如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)、深孔管、發(fā)酵等)。

過夜培養(yǎng)自動(dòng)誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)的培養(yǎng)基系統(tǒng)，培養(yǎng)基都可以大程度上提高pET系列和其它IPTG原核誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)在大腸桿菌中蛋白的表達(dá)量，其的方便之處在于使用這種培養(yǎng)基不需要對(duì)大腸桿菌的生長密度OD值進(jìn)行檢測。因?yàn)镮PTG會(huì)對(duì)細(xì)胞存在毒性，因此使用了這種不含IPTG的自動(dòng)誘導(dǎo)體系培養(yǎng)基與傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比可以使細(xì)胞數(shù)量和目的蛋白量都大大增加教倍。

自誘導(dǎo)LB培養(yǎng)基選購指南

Quantity: 500g

Appearance: Beige powder. Autoclaved medium should be amber.

Storage: 2oC – 25oC. When not in use, keep container closed to avoid hydration.

Preparation:
Add 34,85g of the dehydrated medium to one liter of distilled water. Mix well and dissolve by heating with regular agitation. Boil for 1 minute in order to dissolve completely. Dispense in appropriate containers and sterilize by autoclaving at 121oC for 15 to 20 minutes. Store at 2oC to 8oC.

Formulation (g/L)
Tryptone: 10,00
Yeast Extract: 5,00
MgSO4: 0,15
(NH4) 2SO4: 3,30
KH2PO4: 6,80
Na2HPO4: 7,10
Glucose 0,50
Alpha Lactose 2,00
Final pH (25oC): 7,0 ± 0,2